2.簡(jiǎn)：即用型，步驟簡(jiǎn)單，用時(shí)少，一步離心，淋巴細(xì)胞輕松get；

3.晰：分離條帶清晰，“白膜層"明顯，手殘黨使用也能so easy；

4.高：分離的淋巴細(xì)胞活力好，利于后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用；

5.純：分離的淋巴細(xì)胞純度大于90%，紅細(xì)胞、粒細(xì)胞等雜細(xì)胞少，沒(méi)有分散的細(xì)胞團(tuán)塊，減少雜質(zhì)干擾，使檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確；

6.廣：可以用來(lái)分離人的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，外周血、骨髓、臍帶血等多種血液樣本全覆蓋；

老師，Ficoll分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞的原理是什么?。?/span>

外周血單個(gè)核細(xì)胞 (Peripheral blood mononuclear cell，PBMC）是外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞，其中淋巴細(xì)胞占70%-80%，單核細(xì)胞占10-30%，樹突狀細(xì)胞占1-2%。 

Ficoll根據(jù)血細(xì)胞的密度差異，通過(guò)離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將淋巴細(xì)胞從人外周血或臍帶血中分離出來(lái)。單個(gè)核細(xì)胞的體積、形狀和比重與其他細(xì)胞不同，紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞比重較大，為1.092左右，淋巴細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞比重為1.075左右。

原來(lái)是這樣，那用Ficoll進(jìn)行人外周血中淋巴細(xì)胞分離時(shí)，各層分布的細(xì)胞我也不太明白，可以講解一下嘛？

很簡(jiǎn)單，記住下面這張圖就可以了，在利用Ficoll作密度梯度離心時(shí)，各種血液成分將按密度梯度重新分布聚集：血漿和血小板密度較低，懸浮于分離液的上部；紅細(xì)胞與粒細(xì)胞密度較大，沉于分離液的底部；PBMC 密度稍低于分離液，位于分離液界面之上。因此從管底往上依次為：紅細(xì)胞-Ficoll細(xì)胞分離液-淋巴細(xì)胞-血漿。一般要先小心地將上層的血漿和血小板移除后再吸取淋巴細(xì)胞。

這么看就清晰多啦，可是我的離心結(jié)果中出現(xiàn)了血小板污染，這是為什么呢？

很多情況都可以導(dǎo)致血小板污染，可以從以下幾個(gè)方面對(duì)實(shí)驗(yàn)操作進(jìn)行優(yōu)化：

1.血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)）；

2.離心溫度控制在18～20℃；

3.取目的層樣品時(shí)，需先將上層溶液去掉，再吸取目的層；

4.分離后進(jìn)行洗滌時(shí)，可以在較低的離心力情況下進(jìn)行離心處理，血小板密度比較低，會(huì)留在血漿中，PBMC在沉淀里，通過(guò)這一操作可以除掉一部分血小板；

5.吸取過(guò)多的血漿層也可能會(huì)導(dǎo)致淋巴細(xì)胞中血漿蛋白及血小板污染。

我明白了，那紅細(xì)胞污染又是什么原因呢？

出現(xiàn)紅細(xì)胞污染的原因比較簡(jiǎn)單，可能是由于以下幾個(gè)問(wèn)題：

1.溫度太低。低溫使Ficoll密度變大，從而導(dǎo)致紅細(xì)胞粒細(xì)胞在最底層聚集效果不佳，進(jìn)入上邊的PBMC層；

2.離心速度太慢、離心時(shí)間太短，各層分布的細(xì)胞沒(méi)有得到沉淀，應(yīng)該根據(jù)結(jié)果摸索更適宜的離心條件。

老師你在分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞的時(shí)候還有什么經(jīng)驗(yàn)，快把秘訣分享給我！

那我可得好好和你聊聊了！

1.分離結(jié)果為何出現(xiàn)淋巴細(xì)胞產(chǎn)量低、活力低且出現(xiàn)其它類型細(xì)胞污染的情況？

可能是由于溫度過(guò)高，使Ficoll密度變小，PBMC進(jìn)入分離液層，回收的PBMC數(shù)量減少。也可能是由于血液樣本放置過(guò)長(zhǎng)，或是血液樣本保存和運(yùn)輸途中條件不當(dāng)?shù)仍颉?/span>

2.分離結(jié)果為何出現(xiàn)淋巴細(xì)胞產(chǎn)量低但活力正常的情況？

在分離時(shí)，未用全血及組織稀釋液或者PBS將血液稀釋到1:1，通常情況下，紅細(xì)胞比容較高，高細(xì)胞密度會(huì)導(dǎo)致大量的淋巴細(xì)胞陷入聚集的紅細(xì)胞團(tuán)塊中，此時(shí)應(yīng)進(jìn)一步稀釋血液樣品，提高單核細(xì)胞產(chǎn)量并減小紅細(xì)胞團(tuán)塊的體積。

3.分離結(jié)果為何出現(xiàn)淋巴細(xì)胞低產(chǎn)量且粒細(xì)胞污染增加的情況？

可能是由于離心機(jī)轉(zhuǎn)子振動(dòng)，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞帶的增寬，與下層細(xì)胞混合。應(yīng)先檢查轉(zhuǎn)子是否已平衡，再選擇合適的轉(zhuǎn)速，以避免自發(fā)共振頻率。

謝謝老師，秘訣我都記好啦，那你有沒(méi)有什么產(chǎn)品推薦呢？

當(dāng)然啦，Bioss全新推出的人外周血淋巴細(xì)胞分離液，是一種無(wú)菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液，能夠有效分離人外周血淋巴細(xì)胞，并且保證分離的淋巴細(xì)胞活率，無(wú)菌條件下所分離的細(xì)胞可用于免疫學(xué)檢測(cè)。 有了它你的細(xì)胞分離一定可以事半功倍！